Hotstart Taq DNA pólýmerasi
Hot Start Taq DNA pólýmerasi (mótefnabreyting) er hitastöðugur DNA pólýmerasi frá Thermus aquaticus YT-1， sem hefur 5′→3′ pólýmerasavirkni og 5' flap endónukleasavirkni.Hot-start Taq DNA pólýmerasi er Taq DNA pólýmerasi sem er breytt með hitaþolnum Taq mótefnum.Mótefnabreyting jók sérhæfni, næmi og afrakstur PCR.
Íhlutir
| Hluti | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA pólýmerasi (mótefnabreytt) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Umsóknir
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 við 25 ℃), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM dítíótreítól, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 og 50% glýseról.
Geymsluástand
Flutningur undir 0°C og geymdur við -25°C~-15°C.
Eining Skilgreining
Ein eining er skilgreind sem magn ensíms sem fellur 15 nmól af dNTP inn í sýruóleysanlegt efni á 30 mínútum við 75°C.
Gæðaeftirlit
1.Endonuclease virkni:Ræktun á 20 U af ensími með 4 μg pUC19 DNA í 4 klukkustundir við 37 ℃ leiddi til engra greinanlegs niðurbrots á DNA eins og ákvarðað var með hlauprafdrætti.
2.5 kb Lambda PCR:25 lotur af PCR mögnun á 5 ng Lambda DNA með 1,25 einingum af Taq DNA pólýmerasa í viðurvist 200 µM dNTPs og 0,2 µM primers leiða til væntanlegrar 5 kb vöru.
3.Exonuclease virkni:Ræktun á 50 µl hvarfefni sem inniheldur að lágmarki 12,5 U af Taq DNA pólýmerasa með 10 nmól 5´-FAM fákirni í 30 mínútur við 37 ℃ gefur ekkert greinanlegt niðurbrot.
4.RNase virkni:Ræktun á 10 µL hvarfi sem innihélt 20 U af ensími með 1μg af RNA umritum í 2 klukkustundir við 37°C leiddi til engra greinanlegrar niðurbrots á RNA eins og ákvarðað var með hlauprafdrætti.
5.Hita óvirkjun:Nei.
Viðbragðskerfi
| Íhlutir | Bindi |
| Sniðmát DNAa | valfrjálst |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| dNTP blanda (10mM hver) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA pólýmerasib(5U/μL) | 0,125 μL |
| Kjarnalaust vatn | Allt að 25 μL |
Athugasemdir:
1) a.
| DNA | Magn |
| Erfðafræðilegt | 1 ng-1 μg |
| Plasmíð eða veiru | 1 bls-1 ng |
2) b.Besti styrkur Taq DNA pólýmerasa getur verið á bilinu 5-50 einingar/ml (0,1-0,5 einingar/25 µL hvarf) í sérhæfðum notkunum.
Varma hjólreiðar siðareglur
PCR
| Skref | Hitastig(°C) | Tími | Hringrásir |
| Upphafleg eðlisbreytinga | 95 ℃ | 1-3 mín | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 lotur |
| Hreinsunb | 45-68 ℃ | 15-60 sek | |
| Framlenging | 68 ℃ | 1kb/mín | |
| Lokaframlenging | 68 ℃ | 5 mín | - |
Athugasemdir:
1) Upphafsdenaturation í 1 mín við 95°C nægir fyrir flestar mögnanir.Fyrir erfið sniðmát er mælt með lengri eðlisbreytingu í 2-3 mínútur við 95°C.Með PCR nýlendu er mælt með fyrstu 5 mínútna eðlisbreytingu við 95°C.
2) Glæðingarskrefið er venjulega 15-60 sek.Hitastig hitastigs er byggt á Tm grunnparsins og er venjulega 45-68 ℃.
