Bst 2.0 DNA pólýmerasi (glýseróllaust)
Bst DNA pólýmerasi V2 er unninn úr Bacillus stearothermophilus DNA pólýmerasi I, sem hefur 5′→3′ DNA pólýmerasavirkni og sterka keðjuuppbótarvirkni, en enga 5′→3′ exonucleasa virkni.Bst DNA pólýmerasi V2 hentar ákjósanlega fyrir strengjafærslu, jafnhitafjölgun LAMP (Loop mediated isothermal amplification) og hraða raðgreiningu.
Íhlutir
| Hluti | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNA fjölliða V2 (glýserólfrítt) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Umsóknir
1.LAMP jafnvarma mögnun
2.DNA strengur einn tilfærsluviðbrögð
3.Hátt GC gena raðgreining
4.DNA raðgreining á nanógrömmum.
Geymsluástand
Flutningur undir 0°C og geymdur við -25°C~-15°C.
Eining Skilgreining
Ein eining er skilgreind sem magn ensíms sem fellur 25 nmól af dNTP í sýruóleysanlegt efni á 30 mínútum við 65°C.
Gæðaeftirlit
1.Próteinhreinleikagreining (SDS-PAGE):Hreinleiki Bst DNA pólýmerasa V2 er ≥99% ákvarðaður með SDS-PAGE greiningu með Coomassie Blue greiningu.
2.Exonuclease virkni:Ræktun á 50 μL hvarfefni sem inniheldur að lágmarki 8 U af Bst DNA pólýmerasa V2 með 1 μg λ -Hind Ⅲ melt DNA í 16 klukkustundir við 37 ℃ leiðir ekki til neins greinanlegs niðurbrots eins og ákvarðað er.
3.Nickase virkni:Ræktun á 50 μL hvarfefni sem inniheldur að lágmarki 8 U af Bst DNA pólýmerasa V2 með 1 μg pBR322 DNA í 16 klukkustundir við 37°C leiðir ekki til neins greinanlegs niðurbrots eins og ákvarðað er.
4.RNase virkni:Ræktun á 50 μL hvarfefni sem inniheldur að lágmarki 8 U af Bst DNA pólýmerasa V2 með 1,6 μg MS2 RNA í 16 klukkustundir við 37°C leiðir ekki til neins greinanlegs niðurbrots eins og ákvarðað var.
5.E. coli DNA:120 U af Bst DNA pólýmerasa V2 er skimað fyrir tilvist E. coli erfðaefnis DNA með því að nota TaqMan qPCR með primerum sem eru sérstakir fyrir E. coli 16S rRNA stað.E. coli erfðafræðilega DNA mengunin er ≤1 afrit.
LAMPE Viðbrögð
| Íhlutir | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTP (10mM hver) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Grænn (25×)a | 1,0 μL |
| Primer blandab | 6 μL |
| Bst DNA pólýmerasi V2 (glýserólfrítt) (8 U/uL) | 1 μL |
| Sniðmát | × μL |
| ddH₂O | Allt að 25 μL |
Athugasemdir:
1) a.SYTOTM 16 Grænn (25×): Samkvæmt tilraunaþörfum er hægt að nota önnur litarefni sem staðgöngu;
2) b.Grunnblanda: fengin með því að blanda 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB og önnur rúmmál.
Viðbrögð og ástand
1 × HC Bst V2 Buffer, ræktunarhitastigið er á milli 60°C og 65°C.
Hita óvirkjun
80°C, 20 mín
