Hitastig Næmur UNG
Hitastig Næmur UNG (TS-UNG) er fengin með raðbrigða tjáningu í E. coli.Ensímið hvatar losun óbundins úracíls úr ein- og tvíþátta DNA sem inniheldur úrasíl og er óvirkt gegn RNA.Í samanburði við hefðbundið UNG ensím af E. coli gena uppruna hefur TS-UNG ensím meiri virkni við lágt hitastig (20 ℃ ~ 37 ℃) og er hitanæmt og auðveldlega óvirkjað (50 ℃) og forðast niðurbrot á mögnun sem inniheldur dUTP afurðir við stofuhita með afgangsvirkni sem gæti verið eftir eftir óvirkjun á hefðbundna UNG ensíminu.Þess vegna er TS-UNG ensím ekki aðeins hentugur fyrir PCR mengun varnarviðbrögð, heldur passar einnig vel við RT-PCR mögnunaráætlunina og hægt að nota í RT-PCR mengun varnarviðbrögðum.
Mælt er með umsókn
Forvarnir gegn mengun Mögnun
Geymsluástand
-20°C til langtímageymslu, ætti að blanda vel saman fyrir notkun, forðast tíða frost-þíðingu.
Geymsla biðminni
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stöðugleiki, 50% glýseról.
Eining Skilgreining
Magn ensíms sem þarf til að brjóta niður 1µg af einþátta DNA sem inniheldur dU basa á 1 klukkustund við 37°C er 1 virknieining (U).
Gæðaeftirlit
1.SDS-PAGE rafhleðsluhreinleiki meiri en 98%
2.Niðurbrotsvirkni, lotu-til-lotu stjórnun, stöðugleiki
3.Engin utanaðkomandi kjarnavirkni, engin utanaðkomandi endonucleasa eða exonucleasa mengun.
Leiðbeiningar
| Íhlutir | Rúmmál (μL) | Endanleg einbeiting |
| 10 × PCR buffer (dNTP laus, Mg²+ókeypis) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (skipta um dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × grunnblöndua | 2 | 1× |
| Sniðmát | - | ＜1μg/hvarf |
| ddH₂O | Til 50 | - |
Athugið: a: Ef það er notað fyrir qPCR/qRT-PCR, ætti að bæta flúrljómunarnemanum við hvarfkerfið.Venjulega getur endanlegur grunnstyrkur 0,2 μM gefið góða raun;þegar hvarfvirkni er léleg er hægt að stilla grunnstyrkinn á bilinu 0,2-1 μM.Venjulega er styrkur rannsakans fínstilltur á bilinu 0,1-0,3 μM.Hægt er að gera tilraunir með styrkhalla til að finna bestu samsetningu grunns og rannsaka.
Skýringar
1.Besti hvarfhitastig TS-UNG ensíms er tiltölulega lágt og það er hægt að fínstilla það á bilinu 20 ℃ ~ 37 ℃, skammta ensíms og hvarftíma er hægt að fínstilla á bilinu 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 mín;og ensímið getur verið óvirkt í öfugri umritun.
2.Það er hentugur fyrir PCR og RT-PCR til að koma í veg fyrir mengun.
3.Forðastu tíða frostþíðingu og ekki verða fyrir miklum hitasveiflum.
4.Mismunandi gen sem á að magna upp hafa mismunandi nýtingarvirkni á dUTP og næmi fyrir UNG ensími, þess vegna, ef notkun UNG kerfis leiðir til minnkunar á skynjunarnæmi, ætti að stilla hvarfkerfið og fínstilla, ef þú þarft tæknilega aðstoð, vinsamlegast hafðu samband við fyrirtækið okkar.
