Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Vörunúmer: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) er multiplex magnbundið PCR sett byggt á RNA sem sniðmáti.Í ferli tilraunarinnar var öfug umritun og magn PCR framkvæmd í sömu túpunni, sem einfaldaði tilraunastarfsemina og minnkaði hættu á mengun.Í þessu setti var fyrsta strengurinn cDNA framleitt á skilvirkan hátt með hitaþolnum bakriti og magnað magnbundið með HotStart Tag DNA fjölliðun.Settið inniheldur aðallega bjartsýni MP stuðpúða, ensímblöndu o.s.frv. Stuðpúðalausnin inniheldur nú þegar Mg2+og dNTP.Að auki er þeim þáttum bætt við sem geta í raun hamlað ósértæka PCR mögnun og bætt mögnunarvirkni margra qPCR viðbragða, sem geta tryggt mögnunarvirkni og framkvæmt allt að margfeldi mögnunarviðbrögð.dUTP/UDG kerfinu var bætt við til að koma í veg fyrir hættu á úðabrúsa.
Íhlutir
1. Buffer
2. Ensímblanda
Forskrift
| Hot Start | Innbyggð heit byrjun |
| Uppgötvunaraðferð | Primer-probe uppgötvun |
| PCR aðferð | Eitt skref RT-qPCR |
| Pólýmerasi | Taq DNA pólýmerasi |
| Tegund sýnis | DNA |
Geymsluskilyrði
Varan er send með þurrís og hægt er að geyma hana við -25~-15 ℃ í 1 ár.Það ætti að forðast oftfrysta-þíða.Mælt er með því að vista sérstaklega.
Leiðbeiningar
1.Viðbrögð Kerfi
| Íhlutir | Rúmmál (μL) | Lokastyrkur |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Ensímblöndu | 1 | - |
| Grunnur/nema blanda (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Sniðmát RNA | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | til 25 | - |
Athugasemdir:
Vertu viss um að blanda vel saman fyrir notkun, forðastu óhóflegar loftbólur af völdum kröftugs titrings.
a.Grunnstyrkur: Grunnblanda þar á meðal multiplex grunnur, fer eftir aðstæðum ákjósanlegur grunnstyrkur kannski á milli 0,l og 1,0μM.
b.Kannastyrkur: Rannsóknarblanda þar á meðal margfalda rannsakandamerkingarmun flúrljómandi hóps, fer eftir aðstæðum ákjósanlegur styrkur rannsakanda kannski á milli 0,05 og 0,5μM.
c.Sniðþynning: qPCR er mjög viðkvæmt og mælt er með því að þynna sniðmátið.Control Ct gildið hentar á milli 20 og 35.
d.Kerfisundirbúningur: Vinsamlega undirbúið í ofurhreinu vinnuborðinu og pípettu og hvarfrör án kjarnaleifa;mælt er með því að nota byssuhausinn með síueiningu.Forðist krossmengun og úðamengun.
2. Bjartsýni hjólreiðarBókun
| Hringrás skref | Temp. | Tími | Hringrásir |
| Öfug umritun | 50 ℃a | 20 mín | 1 |
| Upphafsdenaturation | 95 ℃ | 5 mín | 1 |
| Mögnunarviðbrögð | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Athugasemdir:
a.Öfug umritun: Hitastigið getur valið 42°C eða 50°C.
b.Mögnunarviðbrögð: Hitastigið er stillt í samræmi við Tm gildi hönnuðu primeranna.
c.Flúrljómunarmerkjaöflun: Vinsamlega stilltu tilraunaaðferðina í samræmi við kröfur tækjahandbókarinnar.
Skýringar
Vinsamlegast notaðu nauðsynlegar persónuhlífar, svo sem rannsóknarfrakka og hanska, til að tryggja heilsu þína og öryggi.
