Robustart Taq DNA pólýmerasi
Robustart Taq DNA pólýmerasi er heitt start DNA pólýmerasi.Þessi vara getur ekki aðeins hamlað betur ósértæk viðbrögð sem orsakast af ósértækri tengingu primers eða primer aggregation í ferlinu við undirbúning og mögnun PCR kerfis.Þess vegna hefur það framúrskarandi sérhæfni og er áhrifaríkara fyrir mögnun á lágstyrk sniðmátum og það er hentugur fyrir multiplexed PCR mögnunarviðbrögð.Þar að auki hefur þessi vara mjög gott notagildi og hægt er að fá stöðugar mögnunarniðurstöður í mismunandi gerðum PCR viðbragða.
Íhlutir
1.5 U/μL Robustart Taq DNA pólýmerasi
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ ókeypis) (valfrjálst)
3.25 mM MgCl2(valfrjálst)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ ókeypis) inniheldur ekki dNTP og Mg²+, vinsamlegast bættu við dNTP og MgCl2við undirbúning hvarfkerfisins.
Mælt er með umsóknum
1.Hröð mögnun.
2.Margföld mögnun.
3.Bein mögnun á blóði, þurrkum og öðrum sýnum.
4.Uppgötvun öndunarfærasjúkdóma.
Geymsluástand
-20°C til langtímageymslu, ætti að blanda vel saman fyrir notkun, forðast tíða frost-þíðingu.
*Ef úrkoma kemur eftir kælingu er það eðlilegt;Mælt er með því að ná jafnvægi við stofuhita áður en það er blandað og notað.
Eining Skilgreining
Ein virk eining (U) er skilgreind sem magn ensíms sem inniheldur 10 nmól af deoxýríbónúkleótíði í sýruóleysanlegt efni við 74°C í 30 mínútur með því að nota virkjað laxasæðis-DNA sem sniðmát/grunn.
Gæðaeftirlit
1.SDS-PAGE rafhleðsluhreinleiki meiri en 98%.
2.Mögnunarnæmi, lotu-til-lotu stjórnun, stöðugleiki.
3.Engin utanaðkomandi núkleasavirkni, engin utanaðkomandi endónukleasa eða exonucleasa mengun
Leiðbeiningar
Viðbragðsuppsetning
| Íhlutir | Rúmmál (μL) | Lokastyrkur |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ ókeypis)a | 5 | 1× |
| dNTP (10mM hver dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA pólýmerasi (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × grunnblandab | 2 | 1× |
| Sniðmát | - | ＜ 1 μg/hvarf |
| ddH2O | Til 50 | - |
Athugasemdir:
1) a.Stuðpúðinn inniheldur ekki dNTP og Mg²+, vinsamlegast bætið við dNTP og MgCl2við undirbúning hvarfkerfisins.
2) b.Ef það er notað fyrir qPCR/qRT-PCR, ætti að bæta flúrljómandi rannsaka við hvarfkerfið.Venjulega mun endanlegur grunnstyrkur 0,2 μM gefa góðar niðurstöður;ef hvarfvirkni er léleg er hægt að stilla grunnstyrkinn á bilinu 0,2-1 μM.Styrkur rannsakans er venjulega fínstilltur á bilinu 0,1-0,3 μM.Hægt er að gera tilraunir með styrkhalla til að finna bestu samsetningu grunns og rannsaka.
Varma hjólreiðar siðareglur
| Venjulegur PCRferli | |||
| Skref | Hitastig | Tími | Hringrásir |
| Pre-denaturation | 95 ℃ | 1-5 mín | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 10-20 sek | 40-50 |
| Glæðing / Framlenging | 56-64 ℃ | 20-60 sek | |
| Hratt PCRferli | |||
| Skref | Hitastig | Tími | Hringrásir |
| Pre-denaturation | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 1-5 sek | 40-45 |
| Glæðing / Framlenging | 56-64 ℃ | 5-20 sek | |
Skýringar
1.Mögnunarhraði hraðs DNA pólýmerasa ætti ekki að vera minna en 1 kb/10 s.Hitastigshækkun og lækkunarhraði, hitastýringarhamur og skilvirkni hitaleiðni mismunandi PCR tækja eru mjög mismunandi, svo mælt er með því að hámarka bestu hvarfskilyrði fyrir tiltekna hraðvirka PCR tækið.
2.Kerfið er mjög aðlögunarhæft, með meiri sértækni og næmni.
3.Hentar til notkunar sem PCR greiningarhvarfefni með mikilli næmni og er hægt að nota í margfeldi PCR mögnunarviðbrögð.
4.5′→3′ pólýmerasavirkni, 5′→3′ exonukleasavirkni;engin 3′→5′ exonuclease virkni;engin prófarkalestur.
5.Hentar fyrir eigindlegar og megindlegar prófanir á PCR og RT-PCR.
6.3′ endi PCR afurðarinnar er A, sem hægt er að klóna beint inn í T vektor.
7.Mælt er með þriggja þrepa aðferðinni fyrir primera með lágt blöndunarhitastig eða til mögnunar á brotum sem eru lengri en 200 bp.
