RNAse hemill (glýseróllaus)
Murine RNase inhibitor er raðbrigða músa RNase hemill tjáður og hreinsaður úr E.coli.Það binst RNase A, B eða C í 1:1 hlutfalli með ósamgildum tengingum og hindrar þannig virkni ensímanna þriggja og verndar RNA fyrir niðurbroti.Hins vegar er það ekki áhrifaríkt gegn RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H eða RNase frá Aspergillus.Murine RNase inhibitor var prófaður með RT-PCR, RT-qPCR og IVT mRNA, og var samhæfður við ýmsa viðskiptalega bakrita, DNA pólýmerasa og RNA pólýmerasa.
Í samanburði við manna RNase hemla, inniheldur músa RNase hemill ekki tvö cystein sem eru mjög viðkvæm fyrir oxun sem veldur óvirkjun á hemlinum.Það gerir það stöðugt við lágan styrk DTT (minna en 1 mM).Þessi eiginleiki gerir það hentugt til notkunar í viðbrögðum þar sem hár styrkur DTT hefur skaðleg áhrif á viðbrögðin (td rauntíma RT-PCR).
Aumsókn
Þessi vara er hægt að nota mikið í hvaða tilraun sem er þar sem RNase truflun er möguleg til að forðast niðurbrot RNA, svo sem:
1. Fyrsta strengs cDNA nýmyndun, RT-PCR, RT-qPCR, osfrv.;
2. Verndaðu RNA fyrir niðurbroti í in vitro umritun/þýðingu (td veiruafritun in vitro);
3.Hömlun á RNase virkni við RNA einangrun og hreinsun.
Geymsluskilyrði
Geymið við -25～-15℃;
Frysting-þíðingarlotur ≤ 5 sinnum;
Gildir í 1 ár.
Skilgreining eininga
Ein eining er skilgreind sem magn af RNase hemli sem þarf til að hindra virkni 5 ng af RNase A um 50%.
Mólþungi
RNase inhibitor (glýseróllaus) er 50 kDa prótein.
Gæðaeftirlit
Exonuclease Virkni:
Ræktun á 40 U af ensími með 1 μg λ-Hind III meltingar DNA í 16 klukkustundir við 37°C leiddi til engra greinanlegrar niðurbrots á DNA eins og ákvarðað var með hlaup rafdrætti.
Virkni innkirtla:
Ræktun á 40 U af ensími með 1 μg λ DNA í 16 klukkustundir við 37°C leiddi til engra greinanlegrar niðurbrots á DNA eins og ákvarðað var með hlauprafdrætti.
Nicking Virkni:
Ræktun á 40 U af ensími með 1 μg pBR322 í 16 klukkustundir við 37 ℃ leiddi til engra greinanlegrar niðurbrots á DNA eins og ákvarðað var með hlauprafdrætti.
RNase Virkni:
Ræktun á 40 U af ensími með 1,6 μg MS2 RNA í 4 klukkustundir við 37 ℃ leiddi til engra greinanlegrar niðurbrots á RNA eins og ákvarðað var með hlauprafdrætti.
E.coli DNA:
40 U af ensími er greint með TaqMan qPCR.E.coli DNA er ≤ 0. 1pg/40U.
Nathugiðs
1.Ekki hrista eða hræra kröftuglega til að koma í veg fyrir óvirkjun ensíma.
2.RNase hemill er virkur við hitastig á bilinu 25℃ til 55℃ og er óvirkjaður við ≥65℃.
3. Virkni RNase H, RNase 1 og RNase T1 er ekki hindruð.
4. pH-sviðið til að hindra RNase-virkni er breitt (virkt við pH 5-9), sýnir hámarksvirkni við pH 7-8.
