Universal SYBR GREEN qPCR forblöndun (blár)

Vörunúmer: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) er forlausn fyrir 2x rauntíma megindlega PCR mögnun sem einkennist af mikilli næmni og sérhæfni, er blár á litinn og hefur áhrif til að rekja sýni.Kjarnaþátturinn Taq DNA pólýmerasi notar mótefnahitastart til að hindra á áhrifaríkan hátt ósértæka mögnun vegna grunnhitunar við undirbúning sýna.Á sama tíma bætir formúlan við hvetjandi þáttum til að bæta mögnunarvirkni PCR viðbragða og jafna mögnun gena með mismunandi GC innihald (30 ~ 70%), þannig að magn PCR geti náð góðu línulegu sambandi í víðtæku magni svæði.Þessi vara inniheldur sérstaka ROX Passive Reference Dye, sem á við um flest qPCR tæki.Ekki er nauðsynlegt að stilla styrk ROX á mismunandi tækjum.Það er aðeins nauðsynlegt að bæta við grunni og sniðmátum til að undirbúa hvarfkerfið fyrir mögnun.

Íhlutir

Universal Blue qPCR Master Mix

Geymsluskilyrði

Varan er send með íspökkum og hægt er að geyma hana við -25℃~-15℃ í 18 mánuði.Nauðsynlegt er að forðast sterka ljósgeislun við geymslu eða undirbúning hvarfkerfisins.

Forskrift

Leiðbeiningar

1.Viðbragðskerfi

[Athugasemd]: Blandið vandlega fyrir notkun til að forðast of miklar loftbólur vegna kröftugs hristingar.

a) Styrkur grunns: Endanlegur grunnstyrkur er 0,2μmól/L, og einnig er hægt að stilla hann á milli 0,1 og 1,0μmól/L eftir því sem við á.

b) Styrkur sniðmáts: Ef sniðmátið er óþynnt cDNA stofnlausn, ætti rúmmálið sem notað er ekki að fara yfir 1/10 af heildarrúmmáli qPCR hvarfsins.

c) Sniðþynning: Mælt er með að þynna cDNA stofnlausnina um 5-10 sinnum.Besta magn af sniðmáti sem bætt er við er betra þegar Ct gildið sem fæst með mögnun er 20-30 lotur.

d) Viðbragðskerfi: Mælt er með því að nota 20μL eða 50μL til að tryggja virkni og endurtekningarhæfni markgenamögnunar.

e) Kerfisundirbúningur: Vinsamlegast undirbúið þig á ofurhreina bekknum og notaðu odd og hvarfrör án kjarnaleifa;mælt er með því að nota oddana með síuhylkjum.Forðist krossmengun og úðamengun.

2.Viðbragðsáætlun

Venjulegt forrit

Fljótlegt forrit

[Athugasemd]: Hraðaforritið hentar langflestum genum og hægt er að prófa staðlað forrit fyrir einstök flókin gen með efri byggingu.

a) Hitastig og tími við glæðingu: Vinsamlega stilltu í samræmi við lengd primer og markgen.

b) Flúrljómunarmerkjaöflun (★): Vinsamlega stilltu tilraunaaðferðina í samræmi við kröfurnar í notkunarleiðbeiningum tækisins.

c) Bræðsluferill: Hægt er að nota sjálfgefið forrit tækisins venjulega.

3. Niðurstöðugreining 

Að minnsta kosti þrjár líffræðilegar endurtekningar voru nauðsynlegar fyrir magntilraunir.Eftir hvarfið þarf að staðfesta mögnunarferilinn og bræðsluferilinn.

3.1 Mögnunarferill:

Hefðbundin mögnunarferill er S-laga.Magngreining er nákvæmust þegar Ct gildið fellur á milli 20 og 30. Ef Ct gildi er minna en 10 er nauðsynlegt að þynna sniðmátið og framkvæma prófið aftur.Þegar Ct gildið er á milli 30-35 er nauðsynlegt að auka sniðmátsstyrkinn eða rúmmál hvarfkerfisins til að bæta mögnunarvirkni og tryggja nákvæmni niðurstöðugreiningar.Þegar Ct gildið er hærra en 35 geta niðurstöður prófsins ekki greint tjáningu gensins með megindlegum hætti, heldur er hægt að nota þær til eigindlegrar greiningar.

3.2 Bræðsluferill:

Einn toppur bræðsluferilsins gefur til kynna að viðbragðssérhæfni sé góð og hægt sé að framkvæma magngreiningu;ef bræðsluferillinn sýnir tvöfalda eða marga toppa er ekki hægt að framkvæma magngreiningu.Bræðsluferillinn sýnir tvöfalda toppa og nauðsynlegt er að dæma hvort toppurinn sem ekki er markhópurinn sé primer dimer eða ósértæk mögnun með DNA agarósa gel rafdrætti.Ef það er primer dimer, er mælt með því að draga úr primer styrk eða endurhanna primer með mikilli mögnunarvirkni.Ef um ósértæka mögnun er að ræða, vinsamlegast hækkið hitunarhitastigið eða endurhannaðu grunnana með sérhæfni.

Skýringar

Vinsamlegast notaðu nauðsynlegar persónuhlífar, svo sem rannsóknarfrakka og hanska, til að tryggja heilsu þína og öryggi！

Þessi vara er AÐEINS til rannsóknarnotkunar！