Rnasi A
Ríbónúkleasi A (RNaseA) er einþátta fjölpeptíð sem inniheldur 4 tvísúlfíðtengi með mólmassa um 13,7 kDa.RNase A er endoribonucleasi sem brýtur sérstaklega niður einþátta RNA í C og U leifum.Nánar tiltekið greinir klofningin fosfódíestertengi sem myndast af 5'-ríbósa núkleótíðs og fosfathópnum á 3'-ríbósa á aðliggjandi pýrimídínkirni, þannig að 2,3'-hringlaga fosfötin eru vatnsrofuð í samsvarandi 3 ′núkleósíðfosföt (td pG-pG-pC-pA-pG er klofið af RNase A til að mynda pG-pG-pCp og A-PG).RNase A er virkastur við að kljúfa einþátta RNA.Ráðlagður vinnustyrkur er 1-100μG/mL, samhæft við ýmis hvarfkerfi.Hægt er að nota lágan saltstyrk (0-100 mM NaCl) til að skera einþátta RNA, tvíþátta RNA og RNA keðjur sem myndast við RNA-DNA blending.Hins vegar, við háan saltstyrk (≥0,3 M), klýfur RNase A aðeins einþátta RNA sérstaklega sérstaklega.
RNasi A er oftast notaður til að fjarlægja RNA við undirbúning plasmíðs DNA eða erfðaefnis DNA. Hvort DNasi er virkur í undirbúningsferlinu getur auðveldlega haft áhrif á hvarfið.Hefðbundna aðferð við að sjóða í vatnsbaði er hægt að nota til að óvirkja DNase virkni.Þessi vara inniheldur ekki DNase og próteasa og þarfnast ekki hitameðferðar fyrir notkun.Að auki er einnig hægt að nota þessa vöru í sameindalíffræðitilraunum eins og RNase verndargreiningu og RNA raðgreiningu.
Geymsluskilyrði
Hægt er að geyma vöruna við -25～-15℃, gildir í 2 ár.
Leiðbeiningar
Þetta er ein af algengustu aðferðunum til að útbúa RNase A geymslulausn.Það er líka hægt að útbúa það afaðrar aðferðir samkvæmt hefðbundnum aðferðum á rannsóknarstofu eða tilvísunarritum (ssleysist beint upp í 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 eða Tris-NaCl lausn)
1. Notaðu 10 mM natríumasetat (pH 5,2) til að útbúa 10 mg/mL af RNase A geymslulausn
2. Upphitun við 100 ℃ í 15 mín
3. Kældu niður í stofuhita, bætið við 1/10 rúmmáli af 1 M Tris-HCl (pH 7,4), stillið pH þess í 7,4 (fyrirdæmi, bætið við 500 ml af 10g/ml RNase geymslulausn 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Undirpakkað við -20 ℃ fyrir frysta geymslu, sem getur verið stöðugt í allt að 2 ár.
[Athugasemdir]: Þegar RNaseA lausn er soðin við hlutlausar aðstæður myndast RNase útfelling;Sjóðið það við lægra pH og ef það er úrkoma má sjá það sem getur stafað af próteinóhreinindum.Ef botnfall finnst eftir suðu er hægt að fjarlægja óhreinindi með háhraða skilvindu (13000rpm) og síðan undirpakka til frystigeymslu.
Upplýsingar um vöru
| Samheiti | Ríbónúkleasi I;Ribónúkleasi frá brisi;Ríbónúkleasi 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolasi;RNAse A;Endoribonulcease I |
| CAS nr. | 9001-99-4 |
| Útlit | Hvítt frostþurrkað duft |
| Mólþungi | ~ 13,7kDa (amínósýruröð) |
| Ph gildi | 7,6 (virknisvið 6-10) |
| Viðeigandi hitastig | 60 ℃ (virknisvið 15-70 ℃) |
| Virkjar umboðsmaður | Na2+.K+ |
| Inhibitor | RNAse hemill |
| Óvirkjunaraðferð | Ekki er hægt að gera það óvirkt með upphitun, mælt er með því að nota skilvindusúlu |
| Uppruni | Nautgripir |
| Leysni | Leysanlegt í vatni (10mg/ml) |
| Tap á þurru | ≤5,0% |
| Ensímvirkni | ≥60 Kunitz einingar/mg |
| Isoelectric punktur | 9.6 |
Skýringar
Til öryggis og heilsu, vinsamlegast notaðu rannsóknarfrakka og einnota hanska til notkunar.
