Wild Taq DNA pólýmerasi
Taq DNA pólýmerasi er hitastöðugur DNA pólýmerasi frá Thermus aquaticus YT-1, sem hefur 5′→3′ pólýmerasavirkni og 5' flap endónukleasavirkni.
Íhlutir
| Hluti | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA pólýmerasi (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Geymsluástand
Flutningur undir 0°C og geymdur við -25°C~-15°C.
Eining Skilgreining
Ein eining er skilgreind sem magn ensíms sem fellur 15 nmól af dNTP inn í sýruóleysanlegt efni á 30 mínútum við 75°C.
Gæðaeftirlit
1.Próteinhreinleikagreining (SDS-PAGE):Hreinleiki Taq DNA pólýmerasa var ≥95% ákvarðaður með SDS-PAGE greiningu.
2.Endonuclease virkni:Að lágmarki 5 U af Taq DNA pólýmerasa með 1 μg λDNA í 16 klukkustundir við 37 ℃ veldur ekki greinanlegu niðurbroti eins og ákvarðað var.
3.Exonuclease virkni:Að lágmarki 5 U af Taq DNA pólýmerasa með 1 μg λ -Hind Ⅲ melt DNA í 16 klukkustundir við 37 ℃ leiðir ekki til neins greinanlegs niðurbrots eins og ákvarðað var.
4.Nickase virkni:Að lágmarki 5 U af Taq DNA pólýmerasa með 1 μg pBR322 DNA í 16 klukkustundir við 37°C veldur ekki greinanlegu niðurbroti eins og það var ákvarðað.
5.RNase virkni:Að lágmarki 5 U af Taq DNA pólýmerasa með 1,6 μg MS2 RNA í 16 klukkustundir við 37°C veldur ekki greinanlegu niðurbroti eins og ákvarðað var.
6.E. coliDNA:5 U af Taq DNA pólýmerasa er skimað fyrir tilvist E. coli erfðaefnis DNA með því að nota TaqMan qPCR með frumurum sem eru sérstakir fyrir E. coli 16S rRNA staðlinum.E. coli erfðafræðilega DNA mengunin er ≤1 afrit.
7.PCR mögnun (5,0 kb Lambda DNA)- 50 µL hvarf sem inniheldur 5 ng Lambda DNA með 5 einingum af Taq DNA pólýmerasa í 25 lotur af PCR mögnun leiðir til væntanlegrar 5,0 kb vöru.
Viðbragðsuppsetning
| Íhlutir | Bindi |
| Sniðmát DNAa | valfrjálst |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP blanda (10mM hver) | 1 μL |
| 10×Taq buffer | 5 μL |
| Taq DNA pólýmerasib | 0,25 μL |
| Kjarnalaust vatn | Allt að 50 μL |
Athugasemdir:
1) Besti hvarfstyrkur mismunandi sniðmáta er mismunandi.Eftirfarandi tafla sýnir ráðlagða sniðmátsnotkun á 50 µL hvarfkerfi.
| DNA | Magn |
| Erfðafræðilegt | 1 ng-1 μg |
| Plasmíð eða veiru | 1 bls-1 ng |
2) Besti styrkur Taq DNA pólýmerasa getur verið á bilinu 0,25 µL~1 µL í sérhæfðum notkunum.
ViðbrögðForrit
| Skref | Hitastig(°C) | Tími | Hringrásir |
| Upphafleg eðlisbreytinga | 95 ℃ | 5 mín | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 lotur |
| Hreinsunb | 60 ℃ | 15 sek | |
| Framlenging | 72 ℃ | 1kb/mín | |
| Lokaframlenging | 72 ℃ | 5 mín | - |
Athugasemdir:
1) Upphaflega eðlisbreytingarskilyrðið hentar flestum mögnunarviðbrögðum og hægt er að breyta því í samræmi við flókið sniðmátsuppbyggingu.Ef sniðmátsuppbyggingin er flókin, er hægt að lengja for-eðlunartímann í 5 – 10 mínútur til að bæta upphaflegu eðlisbreytingaráhrifin.
2) Stilla þarf hitastigið í samræmi við Tm gildi grunnsins, sem er almennt stillt á 3 ~ 5 ℃ lægra en Tm gildi grunnsins;Fyrir flókin sniðmát er nauðsynlegt að stilla hitastig glæðingar og lengja framlengingartíma til að ná fram skilvirkri mögnun.
