Superstart qPCR Premix plus-UNG
Vörunúmer: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG er sérhæft hvarfefni hannað fyrir rauntíma PCR eigindleg og megindleg viðbrögð með því að nota rannsaka byggða uppgötvun, þróað sérstaklega fyrir frostþurrkunarferli.Það inniheldur nýtt hotstart ensím Hotstart Taq plus (DG), sem hefur Taq ensímvirkni sína innsiglaða við stofuhita, sem hindrar á áhrifaríkan hátt ósértæka mögnun af völdum ósérhæfðrar ræsingar eða primer dimer myndun við lágt hitastig, og bætir þannig. sérhæfni mögnunarviðbragðsins.Þetta hvarfefni notar bjartsýni qPCR sértækan biðminni og UNG/dUTP mengunarvarnarkerfi til að ná hraðri heitræsingu, sem bætir verulega skilvirkni og næmni qPCR viðbragða.Það getur fengið góða staðlaða feril á fjölmörgum magngreiningarsvæðum og framkvæmt magngreiningu nákvæmlega og komið í veg fyrir falska jákvæða mögnun af völdum leifar af PCR vörum eða úðabrúsamengun.Þetta hvarfefni er samhæft við flest flúrljómandi magn PCR tæki frá framleiðendum eins og Applied Biosystems, Eppendorf, BioRad og Roche o.fl., og sýnir góðan stöðugleika í frostþurrkuðu formi.
Samsetning hvarfefna
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ókeypis) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×vökvavörn (valfrjálst)
Geymsluskilyrði
Langtíma geymsla við -20 ℃;Hægt að geyma við 4 ℃ í allt að 3 mánuði.Blandið vel saman fyrir notkun ogforðast endurtekna frystingu og þíðingu.
Hjólreiðarbókun
Málsmeðferð | Temp. | Tími | Hringrás |
Melting | 50 ℃ | 2 mín | 1 |
Pólýmerasa virkjun | 95 ℃ | 1~5 mín | 1 |
Denature | 95 ℃ | 10~20 sek | 40-50 |
Hreinsun og framlenging | 56 ~ 64 ℃ | 20~60 sek | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Systilkur Undirbúningur
Samsetning |
25µL rúmmál |
50µL rúmmál |
Lokastyrkur |
5×HotstartPremix plús-UNG(Mg2+ókeypis) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
250mM MgCl2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
4×vökvavörn1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
25×Primer-Probe Blanda2 | 1µL | 2µL | 1× |
Sniðmát DNA3 | —— | —— | —— |
ddH2O | Til 25µL | Að 50µL | —— |
1. Lokastyrkur 0,2μM fyrir primers gefur venjulega góðan árangur;þegar viðbragðsárangur er lélegur skal stilla grunnstyrk á bilinu 0,2-1μM eftir þörfum.Kannastyrkur er venjulega fínstilltur á bilinu 0,1-0,3μM með hallatilraunum til að finna bestu samsetningar.
2. Fjöldi afrita markgena sem eru í mismunandi gerðum af sniðmátum er mismunandi;ef nauðsyn krefur er hægt að framkvæma hallaþynningu til að ákvarða ákjósanlegt magn sniðmátsuppbótar.
3. Þetta kerfi er hægt að frostþurrka;þegar viðskiptavinir nota þetta kerfi án krafna um frostþurrkun, er hægt að velja 4× frostþurrkunarefni til að bæta við; ef þörf er á frostþurrkuðum vörum, meðan á frammistöðuprófun vöru á fljótandi hvarfefnum stendur, verður það að bæta við 4× frostþurrkunarefni til að tryggja samræmi við frostþurrkuðu kerfishlutana og áhrifum.
Þegar kerfið er notaðd fyrir frostþurrkun, undirbúið kerfi as eftirfarandi:
Samsetning | 25µL Viðbragðskerfi |
5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ókeypis) (DG) | 5µL |
250mM MgCl2 | 0,45 µL |
4×vökvavörn | 6,25 µL |
25×Primer-Probe Blanda | 1µL |
ddH2O | Að 18~20µL |
* Ef þörf er á öðrum kerfum fyrir frostþurrkun, vinsamlegast hafðu samband við það sérstaklega.
Frostþurrkunarferliss
Málsmeðferð | Temp. | Tími | Ástand | Þrýstingur |
Forfrysting | 4℃ | 30 mín | Haltu |
1 atm |
-50 ℃ | 60 mín | Kæling | ||
-50 ℃ | 180 mín | Haltu | ||
Aðalþurrkun | -30 ℃ | 60 mín | Upphitun |
Ultimate Vacuum |
-30 ℃ | 70 mín | Haltu | ||
Secondary þurrkun | 25℃ | 60 mín | Upphitun |
Ultimate Vacuum |
25℃ | 300 mín | Haltu |
2. Ofangreint frostþurrkunarferli er eingöngu til viðmiðunar.Mismunandi vörutegundir og mismunandi frystiþurrkarar hafa mismunandi færibreytur, þannig að hægt er að stilla þær í samræmi við raunverulegar aðstæðuraðstæður við notkun.
3. Mismunandi frostþurrkunarferli geta verið hentugur fyrir mismunandi lotustærðir af frostþurrkuðuvörur, þannig að fullnægjandi sannprófun verður að fara fram þegar þau eru notuð til stórframleiðslu.
Leiðbeiningar um notkun frostþurrkunard duft
1. Skildu frostþurrkaða duftið stuttlega;
2. Bætið kjarnsýrusniðmáti við frostþurrkaða duftið og bætið vatni upp að 25µL;
3. Blandið vel saman með skilvindu og keyrið á vél.
Gæðaeftirlit:
1. Virkniprófun: næmni, sérhæfni, endurgerðanleiki qPCR.
2. Engin utanaðkomandi kjarnavirkni, engin utanaðkomandi endo/exonucleasa mengun.
Tæknilegar upplýsingar:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG notar nýtt heitræsingarensím sem gerir hraðræsingu kleift innan 1~5 mínútna;í gegnum sérstaka stuðpúðasamsetningu er það hentugur fyrir margfeldi flúrljómandi magn PCR viðbrögð.
2. Það hefur meiri sértækni sem bætir verulega næmni flúrljómunar megindlegrar PCR takmörkunar uppgötvunar, sem gerir mögnunarferla eðlilega, flúrljómunargildi ná augljósum framförum við lágstyrk sniðmát, hentugur sem hánæm flúrljómunar magn PCR uppgötvunarhvarfefni.
3. Mælt er með 3-þrepa aðferð fyrir primera með lægra hitastig við hitun eða lengri en 200bp brot.
4. Nýtingarvirkni dUTP og næmi fyrir UNG ensími er mismunandi fyrir mismunandi markgen, þannig að ef notkun UNG kerfis leiðir til lækkunar á greiningarnæmi ætti að stilla hvarfkerfið og fínstilla það.Ef þörf er á tæknilegri aðstoð vinsamlegast hafðu samband við fyrirtækið okkar.
5. Notaðu sérstök svæði og pípettur fyrir og eftir mögnun, notaðu hanska meðan á notkun stendur og skiptu þeim oft út;ekki opna hvarfglasið eftir að PCR er lokið til að lágmarka mengun sýna af PCR vörum.