DNA útdráttur Mini Kit

Geymsluskilyrði

Geymið við -15 ~ -25 ℃ og flytjið við stofuhita.

Íhlutir

VLF:DNA bindandi biðminni.

Buffer GW:Þvottapúði;bætið algeru etanóli við tilgreint rúmmál á flöskunni fyrir notkun.

Skorunarstuðli:Úthreinsun.

FastPure DNA Mini Columns-G:DNA aðsogssúlur.

Söfnunarrör 2 ml:Söfnunarrör fyrir síuvökva.

Undirbúið efni

1,5 ml dauðhreinsuð glös, algjört etanól og ísóprópanól (þegar DNA brot ≤100 bp, bætið við 1 bindi

ísóprópanól til 1 rúmmáls hlaup), vatnsbað.

Tilraunaferli

Bætið 80 ml af etanóli til að þynna Buffer GW eins og tilgreint er á miðanum fyrir notkun, geymið við stofuhita.

Vélbúnaður

1. PCR hvarflausn

Gelútdráttarkerfi: Bæta við jöfnu rúmmáli Buffer GDP PCR hvarflausn endurheimtarkerfi:Bættu við 5 sinnum rúmmálsbuffaranum

2. VLF Reiknaðu rúmmál hlaups (100  μl jafngildir 100 mg)

Leysið upp hlaup

3. Forhitið við 50 ~ 55℃

4. Bind Þvottur

Bættu við 300 μL af biðminni landsframleiðslu*

Bætið við 700 μL af Buffer GW

Bætið við 700 μL af Buffer GW

5. Elúta

Bætið við 20 – 30μL af skolunarbuffi eða afjónuðu vatni

Athugasemdir* Endurheimt PCR hvarfvökva án þessa skrefs

Gel útdráttaráætlun

1. Eftir DNA rafdrætti til að sundra DNA bútum, skerið eina röndina af DNA brotinu úr agarósagelinu undir UV ljósi.Mælt er með því að nota gleypið pappír til að gleypa raka hlaupsins og lágmarka stærð hlaupsneiðarinnar með því að fjarlægja auka agarósa eins og þú getur.Vigtið hlaupsneið (án örskilvindurörs) til að reikna út rúmmál hennar: Rúmmál 100 mg hlaupsneiðar er um það bil 100 μL, að því gefnu að þéttleikinn sé 1g/ml.

2. Bætið við jöfnu rúmmáli Buffer GDP, ræktið við 50~55 ℃ í 7-10 mínútur (í samræmi við hlaupstærðina, stillið ræktunartíma þar til hlaupið er alveg uppleyst).Hvolfið túpunni 2 sinnum á meðan á ræktun stendur.

Δ Viðbót á 1-3 rúmmálum af Buff GDP mun ekki hafa áhrif á skilvirkni DNA endurheimtarinnar.Ef DNA brotið sem á að endurheimta <100 bp, þarf að bæta við 3 bindum af Buffer GDP;þegar gel sneiðin er alveg uppleyst, bætið 1 rúmmáli af ísóprópanóli út í og ​​blandið vandlega saman og haldið síðan áfram í næsta skref.

3. Miðfleyttu stuttlega til að koma sýninu á botn túpunnar, settu FastPure DNA Mini Columns-G í safnglösin 2 ml, flyttu lausnina varlega að hámarki 700 μL einu sinni á

tíma að síunarsúlunum, skilið við 12.000 rpm (13.800 X g) í 30-60 sek.

4. Fargið síuvökvanum og bætið 300 μL af Buffer GDP í ​​súluna, ræktið við stofuhita í 1 mín., skilið í skilvindu við 12.000 rpm (13.800 X g) í 30-60 sek.

5. Fargið síuvökvanum og bætið 700 μL af Buffer GW (athugið hvort algeru etanóli hafi verið bætt fyrirfram!) í súluna, skilið við 12.000 rpm (13.800 X g) í 30-60 sek.

Δ Vinsamlegast bættu Buffer GW í kringum aðsogssúlunavegginn, eða bættu Buffer GW bakhliðinni og blandaðu því á hvolf í 2 – 3 sinnum til að hjálpa til við að skola saltið sem loðir við rörvegginn alveg.

6. Endurtaktu skref 5.

Δ Skolun með Buffer GW tvisvar getur tryggt að saltið sé alveg fjarlægt og útilokað áhrifin á síðari tilraunir.

7. Fleygðu síuvökvanum og skildu tómu súlunni í skilvindu við 12.000 rpm (13.800 X g) í 2 mín.

8. Stingið súlunni í hreint 1,5 ml örskilvinduglas, bætið 20 - 30 μL af skolunarbuffi við miðju súluhimnunnar, ræktið í 2 mínútur og skilið síðan við 12.000 rpm (13.800 X g) í 1 mín.Fargið súlunni, geymið DNA sem fæst við -20°C.

Δ Flutningur flotans í skrefi 8 yfir í súluna til að skola aftur og forhitun skolunarbuffarans í 55 (þegar DNA brot >3 kb) gæti verið gagnlegt til að auka skilvirkni endurheimtarinnar.

PCR vörur bata forrit

Þessi samskiptaregla á við til að hreinsa DNA brot úr PCR vörum, ensímhvarfakerfi og öðrum hráefni DNA (þar á meðal erfðafræðilegt DNA).Þessi lausn getur á skilvirkan hátt fjarlægt ýmis núkleótíð, primer, primer dimer, salt sameindir, ensím og önnur óhreinindi.

1. Skilið stuttlega PCR vörur, ensímhvarfalausn og aðrar DNA hrávörur í skilvindu.Metið rúmmál þeirra með pípettu og flytjið yfir í sótthreinsað 1,5 ml eða 2 ml rör.Bætið ddH2O við þar til rúmmálið er allt að 100 μL;en fyrir erfðafræðilegt DNA með háum styrk, mun þynning í 300 μL með ddH2O hjálpa til við að bæta endurheimt.

2. Bætið við 5 rúmmálum af Buffer GDP, blandið vandlega með því að snúa við eða hringiða.Ef DNA brot sem vekur áhuga >100 bp, þarf að bæta við 1,5 rúmmáli (sýni + Buffer GDP) af etanóli til viðbótar.

3. Settu súluna aftur í söfnunarglasið, flyttu blönduna yfir í súluna, skildu við 12.000 rpm (13.800 ×g) í 30 – 60 sek.Ef rúmmál blönduðu lausnarinnar er >700 µL, setjið aðsogssúluna aftur í söfnunarglasið, flytjið afganginn af lausninni yfir í aðsogssúluna og skilið við 12.000 rpm (13.800 × g) í 30 – 60 sek.

4. Næsta frammistaða vísar til skrefs 5 – 8 í 08- 1/Gel útdráttaráætluninni.