DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
Vörunúmer: HC4007A
DNasi I (Deoxyribonuclease I) er endodeoxyribonuclease sem getur melt ein- eða tvíþátta DNA.Það þekkir og klýfur fosfódíestertengi til að framleiða mónódeoxýnukleótíð eða ein- eða tvíþátta fákýni með fosfathópum í 5'-endanum og hýdroxýl í 3'-endanum.Virkni DNase I fer eftir Ca2+og hægt er að virkja með tvígildum málmjónum eins og Mn2+og Zn2+.5 mM Ca2+verndar ensímið gegn vatnsrofi.Í viðurvist Mg2+, gæti ensímið af handahófi þekkt og klofið hvaða stað sem er á hvaða DNA streng sem er.Í viðurvist Mn2+, er hægt að þekkja tvíþræði DNA samtímis og klofna á næstum sama stað til að mynda flata enda DNA búta eða klístraða enda DNA búta með 1-2 núkleótíð útstæð.
Íhlutir
| Nafn | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-frítt | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 ml |
Geymsluskilyrði
-25 ℃ ~ -15 ℃ fyrir geymslu;Flutningur undir íspoka.
Leiðbeiningar
1. Undirbúið hvarflausnina í RNase-lausu rörinu í samræmi við hlutföllin sem talin eru upp hér að neðan:
| Hluti | Bindi |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I buffer | 1μL |
| DNase I, RNase-frítt (5U/μL) | 1 U á µg RNA① |
| ddH2O | Allt að 10μL |
Athugið: ①Reiknið út rúmmál DNase I sem þarf að bæta við miðað við magn RNA.
2. 37 ℃ í 15 mínútur;
3. Bætið 0,5M EDTA við lokastyrkinn 2,5mM~5mM og hitið við 65℃ í 10 mínútur til að stöðva hvarfið.Sýnið er hægt að nota beint fyrir næstu viðbrögð eins og öfuga umrituntilraun.
Eining Skilgreining
Ein eining er skilgreind sem magn ensíms sem brotnar niður 1 µg af pBR322 að fulluDNA á 10 mínútum við 37 ℃.
Gæðaeftirlit
RNase:5U af DNase I með 1,6 µg MS2 RNA í 4 klukkustundir við 37 ℃ gefur ekkert niðurbrot þar semákvarðað með agarósa gel rafdrætti.
Skýringar
1. Vinsamlega undirbúið 0,5MEDTA sjálfur.
2. Notaðu 1U DNase I fyrir hvert µg af RNA.Hins vegar, ef RNA er minna en 1µg, vinsamlegast notaðu 1U DNase I.
3. Vinsamlegast settu ensímið á ís meðan á notkun stendur.
