2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Vörunúmer: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) er hannað til að framkvæma PCR beint úr sýnum án DNA útdráttar eða undirbúnings sýnis.Þetta hvarfefni samanstendur af heitbyrja DNA pólýmerasa, uracil DNA glýkósýlasa (UNG), RNasa hemli, MgCl2, dNTP (með dUTP í stað dTTP) og stöðugleikar, fyrir magn PCR (qPCR).Þetta hvarfefni hefur mikið hemlaþol og því er hægt að nota það beint til að greina sýni eins og hálsþurrku, munnvatn, blóðstorknuðu heilblóði, plasma og sermi án DNA-útdráttar.Hvarfefnið notar sérbjóða fyrir qPCR með blönduðum ensímum af hamlandi DNA pólýmerasa og UNG ensími.Þess vegna getur það fengið góða mögnun á markgenum í sýnum sem innihalda hemla og hindrað falska jákvæða mögnun af völdum PCR leifar og úðamengunar.Þetta hvarfefni er samhæft við flest flúrljómandi magn PCR tæki, eins og Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche og svo framvegis.
Íhlutir
1. 50×SensiDirect Ensím/UNG blanda
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Geymsluskilyrði
Allir íhlutir ættu að geyma við -20 ℃ fyrir langtíma geymslu og 4 ℃ í allt að 3 mánuði.Vinsamlegast blandið vandlega eftir þíðingu og skilið fyrir notkun.Forðist tíða frost-þíðingu.
Hjólreiðarbókun
| Skref | Hitastig | Tími | Hringrás |
| Melting | 50 ℃ | 2 mín | 1 |
| Pólýmerasa virkjun | 95 ℃ | 1-5 mín | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| Hreinsun/framlenging | 56-64 ℃ | 20-60s |
Leiðbeiningar um pípulagningu
| Hvarfefni | Rúmmál pr viðbrögð | Rúmmál á hverja viðbrögð | Lokastyrkur |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect ensím/UNG blanda | 0,5 µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Blanda1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Sýnishorn3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Heildarmagn | 25 μL | 50 μL | - |
1. Lokastyrkur grunns er venjulega 0,2μM.Til að ná betri árangri er hægt að fínstilla grunnstyrkinn á bilinu 0,2-1μM.
2. Almennt er hægt að fínstilla mælikvarðastyrkinn á bilinu 0,1-0,3μM.Besti styrkur rannsakans tengist rauntíma PCR mögnunartækinu, gerð rannsakans og gerð flúrljómandi merkingarefnis.Vinsamlegast skoðaðu handbók tækisins eða sérstakar kröfur hvers flúrljómunarnema.
3. Mismunandi gerðir sýna innihalda mismunandi gerðir og innihald hemla og afritanúmer markgena.Rúmmál sýna ætti að taka tillit til raunverulegs ástands.Þynntu sýnið með því að bæta við nukleasafríu vatni eða TE Buffer, ef þörf krefur.
4. Ráðlagt magn mismunandi sýna:
| Sýnishorn | Magn fyrir einn 50 μL viðbrögð | Hámark hlutfall |
| Blóðþynnt heilblóð | 2,5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Hálsþurrkur | 10 μL | 20% |
| Munnvatni | 10 μL | 20% |
Gæðaeftirlit
1. Aðgerðagreining: næmni, sértækni og endurtekningarhæfni qPCR.
2. Engin utanaðkomandi kjarnavirkni: engin utanaðkomandi endonuclease og exonuclease mengun.
Athugasemdir um vöru
1. Þessi vara notar nýja tegund af heitbyrjun DNA-pólýmerasa, sem hægt er að virkja á 1-5 mínútum. Þar sem hvarfjafnalausnin hefur verið fínstillt er hún hentugri fyrir tvöfalda eða margfalda flúrljómun magn PCR með því að nota rannsakaaðferð.
2. Ef Rn gildi PCR mögnunar er of lágt eða mögnunin er augljóslega hindruð, getur minnkað sýnismagn, aukið hvarfmagn eða fyrri þynning sýnisins bætt niðurstöðurnar.
3. Söfnun blóðs, munnvatns, þvags, hálsþurrkunar o.s.frv. ætti að fylgja klínískum viðmiðunarkröfum og hægt er að nota nýtt sýni til að koma í veg fyrir niðurbrot kjarnsýru.
4. Þar sem mismunandi amplicons hafa mismunandi nýtingarvirkni en dUTP og næmi fyrir UNG, ætti að fínstilla hvarfefnin ef greiningarnæmið minnkar þegar UNG kerfið er notað.Vinsamlegast hafðu samband við okkur til að fá tæknilega aðstoð ef þörf krefur.
5. Til að koma í veg fyrir mögnun á flutningi PCR efna á milli eins þrepa viðbragða, þarf sérstakt tilraunasvæði og pípettu fyrir mögnun.Notaðu með hanska og skiptu oft um og opnaðu ekki hvarfglasið eftir PCR mögnun.
