UDG/UNG ensím
UDG(úrasíl DNA glýkósýlasi) getur hvatað vatnsrof á N-glýkósíð tenginu milli úrasíl basans og sykurfosfat burðarás í ssDNA og dsDNA.Það getur auðveldlega stjórnað úðabrúsamengun og er hentugur fyrir algeng sameindalíffræðikerfi eins og PCR, qPCR, RT-qPCR og LAMP.
Tæknilýsing
| Tjáningargestgjafi | Raðbrigða E. coli með uracil DNA glýkósýlasa gen |
| Mólþyngd | 24. 8kDa |
| Hreinleiki | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Hita óvirkjun | 95 ℃, 5~10 mín |
| Eining Skilgreining | Ein eining (U) er skilgreind sem magn ensíms sem þarf til að hvata vatnsrof á 1 μg dU-innihaldandi dsDNA á 30 mínútum við 25 ℃. |
Geymsla
Varan ætti að geyma við -25℃ ~ -15°C í tvö ár.
Leiðbeiningar
1.Undirbúningur PCR hvarfblöndunnar samkvæmt eftirfarandi kerfi
| Íhlutir | Rúmmál (μL) | Endanleg einbeiting |
| 10×PCR buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmól/LMgCl | 3 | 1,5 mmól/L |
| dUTP(10 mmól/L) | 3 | 0,6 mmól/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmól/skolun) | 1 | 0,2 mmól/skolun |
| Sniðmát DNA | X | - |
| Grunnur1 (10μmól/L) | 2 | 0,4 μmól/L |
| Grunnur 2 (10μmól/L) | 2 | 0,4 μmól/L |
| Taq DNA pólýmerasi (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylasi (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Allt að 50 | - |
Athugið: Samkvæmt tilraunakröfum er hægt að stilla lokastyrk dUTP á milli 0,2-0,6 mmól/L og 0,2 mmól/L dTTP er hægt að bæta við vali.
2.Mögnunaraðferð
| Hjólaskref | Hitastig | Tími | Hringrásir |
| niðurbrot sem inniheldur dU sniðmát | 25℃ | 10 mín | 1 |
| UDG virkjun, sniðmát upphafsdenaturation | 95 ℃ | 5 ~ 10 mín | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 |
| Hreinsun | 60 ℃ | 20 sek | |
| Framlenging | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Endanleg framlenging | 72℃ | 5 mín | 1 |
Athugið: Viðbragðstímann við 25°C er hægt að stilla innan 5-10 mín í samræmi við tilraunakröfur.
Skýringar
1.UDG er virkt í flestum PCR hvarfstuðpúða.
2.Ensím á að geyma í ísskáp eða á ísbaði þegar þau eru notuð og á að geyma við -20°C strax eftir notkun.
3.Vinsamlegast notaðu nauðsynlegar persónuhlífar, svo sem rannsóknarfrakka og hanska, til að tryggja heilsu þína og öryggi!
