Multiplex qPCR Probe Premix
Vörunúmer: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) er forlausn fyrir 2x rauntíma magn PCR mögnunar sem einkennist af mikilli næmni og sérhæfni, sem er blár á litinn og hefur áhrif til að bæta við sýni.Þessi vara er 2× Mix forblandað hvarfefni sem gerir allt að fjórum flúrljómandi megindlegum PCR viðbrögðum kleift í einum hvarfbrunni.Þessi vara inniheldur erfðabreyttu mótefnaaðferðina til að heitræsa Taq ensím, sem bætir mögnunarnæmi og sérhæfni til muna.Á sama tíma hefur þessi vara mjög fínstillt fjölhvarfsbuffið, sem getur bætt mögnunarskilvirkni hvarfsins og stuðlað að skilvirkri mögnun á lágstyrkssniðmátum.Þessa vöru er hægt að nota til arfgerðargreiningar og multiplex megindlegrar greiningar.
Forskrift
| Hot Start | Innbyggð heit byrjun |
| Uppgötvunaraðferð | Primer-probe uppgötvun |
| PCR aðferð | qPCR |
| Pólýmerasi | Taq DNA pólýmerasi |
| Tegund sýnis | DNA |
Geymsluskilyrði
Varan er send með þurrís og má geyma við -25~-15 ℃ í 2 ár.
Leiðbeiningar
1. ViðbrögðKerfi
| Íhlutir | Rúmmál (μL) | Lokastyrkur |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Grunnblanda (10 μmól/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmól/L |
| Kannablanda (10 μmól/L)b | × | 50 - 250 nmól/L |
| Rox viðmiðunarlitur | 0,5 | 1× |
| Sniðmát DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | upp í 25 | - |
Athugasemdir:Blandið vandlega fyrir notkun til að forðast of miklar loftbólur vegna kröftugs hristingar.
a.Grunnstyrkur: Primer Mix inniheldur mörg pör af grunni, venjulega hver grunnur í lokastyrk 0,2 μmól/L og er einnig hægt að stilla á milli 0,1 og 0,5 μmól/L eftir því sem við á.
b.Kannastyrkur: Probe Mix inniheldur marga nema með mismunandi flúrljómunarmerkjum og hægt er að stilla styrk hvers nema á milli 50 og 250 nmól/L í samræmi við sérstakar aðstæður.
1.Rox litarefni tilvísun: Það er notað á rauntíma PCR mögnunartæki eins og Applied Biosystems til að leiðrétta villu flúrljómunarmerkis sem myndast á milli brunna;þessi vara inniheldur ekki Rox litarefni tilvísun.Mælt er með Cas#10200 ef þörf krefur.
2.Sniðþynning: qPCR er mjög viðkvæmt og mælt er með því að þynna sniðmátið til notkunar.Ef sniðmátið er cDNA stofnlausn, ætti sniðmátsrúmmálið ekki að fara yfir 1/10 af heildarrúmmálinu.
3.Viðbragðskerfi: Mælt er með 25μL, 30μL eða 50μL til að tryggja virkni og endurtekningarhæfni markgenamögnunar.
4.Kerfisundirbúningur: Vinsamlegast undirbúið þig á ofurhreina bekknum og notaðu odd og hvarfrör án kjarnaleifa;mælt er með því að nota oddana með síuhylkjum.Forðist krossmengun og úðamengun.
2.Viðbragðsáætlun
| Hjólaskref | Temp. | Tími | Hringrásir |
| Upphafsdenaturation | 95 ℃ | 5 mín | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Hreinsun/framlenging | 60 ℃ | 30 sek |
Athugasemdir:
1.Hljóðrun/framlenging: Hægt er að stilla hitastig og tíma á viðeigandi hátt í samræmi við hannað grunn Tm gildi.
2.Flúrljómunarmerkjaöflun: Flúrljómunarmerkjaöflunartíminn sem þarf fyrir mismunandi qPCR greiningartæki er mismunandi, vinsamlegast stilltu í samræmi við lágmarkstímamörk.Tími nokkurra algengra hljóðfæra er stilltur sem hér segir:
20 sek: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 sek: Applied Biosystems 7500
Skýringar
Vinsamlegast notaðu nauðsynlegar persónuhlífar, svo sem rannsóknarfrakka og hanska, til að tryggja heilsu þína og öryggi!
