Arfgerðarsett fyrir mús

Vörunúmer: HCR2021A

Þessi vara er sett sem hannað er fyrir hraða auðkenningu á arfgerðum músa, þar með talið DNA hráefnisútdrátt og PCR mögnunarkerfi.Hægt er að nota vöruna til PCR mögnunar beint úr músarhala, eyra, tá og öðrum vefjum eftir einfalda klofningu með Lysis Buffer og Proteinase k.Engin melting yfir nótt, fenól-klóróform útdráttur eða súluhreinsun, sem er einfalt og styttir tímafreka tilrauna.Varan er hentug til mögnunar á markbútum allt að 2kb og margfeldis PCR viðbragða með allt að 3 pörum af frumum.2×Mouse Tissue Direct PCR blandan inniheldur erfðabreyttan DNA pólýmerasa, Mg²⁺, dNTPs og fínstillt stuðpúðakerfi til að veita mikla mögnunarvirkni og hemlaþol, þannig að hægt sé að framkvæma PCR viðbrögð með því að bæta við sniðmáti og primers og endurvökva vöruna í 1×.PCR afurðin sem er mögnuð upp með þessari vöru hefur áberandi „A“ basa í 3′ endanum og hægt er að nota hana beint fyrir TA klónun eftir hreinsun.

Íhlutir

Geymsluskilyrði

Vörur ættu að geyma við -25 ~ -15 ℃ í 2 ár.Eftir þíðingu er hægt að geyma Lysis Buffer við 2 ~ 8 ℃ fyrir skammtíma margþætta notkun og blanda vel saman við notkun.

Umsókn

Þessi vara er hentugur fyrir músaútsláttargreiningu, erfðafræðilega uppgötvun, arfgerð og svo framvegis.

Eiginleikar

1.Einföld aðgerð: engin þörf á að vinna erfðafræðilegt DNA;

2.Víðtæk notkun: hentugur fyrir beina mögnun á ýmsum vefjum músa.

Leiðbeiningar

1.Losun erfðafræðilegs DNA

1) Undirbúningur lýsat

Vefjalýsi er útbúið í samræmi við fjölda mússýna sem á að lýsa (vefjalýsa skal útbúa á staðnum í samræmi við skammta og blanda vandlega til notkunar), og hlutfall hvarfefna sem þarf fyrir eitt sýni er sem hér segir:

2) Sýnaundirbúningur og lýsing

Ráðlögð notkun vefja

Taktu viðeigandi magn af músavefssýnum í hreinum skilvinduglösum, bættu 200μL af fersku vefjalýsi við hvert skilvindurör, hringdu og hristu, ræktaðu síðan við 55 ℃ í 30 mínútur og hitaðu síðan við 98 ℃ í 3 mínútur.

3) Miðflótta

Hristið lýsið vel og skilið í skilvindu við 12.000 rpm í 5 mín.Hægt er að nota flotið sem sniðmát fyrir PCR mögnun.Ef sniðmátið er nauðsynlegt til geymslu, flytjið flotið yfir í annað dauðhreinsað skilvindurör og geymið við -20 ℃ í 2 vikur.

2.PCR mögnun

Fjarlægðu 2×Mouse Tissue Direct PCR blönduna frá -20 ℃ og þíðaðu á ís, blandaðu á hvolf og undirbúið PCR hvarfkerfið í samræmi við eftirfarandi töflu (vinnið á ís):

Athugið:

a) Magnið sem bætt er við ætti ekki að fara yfir 1/10 af kerfinu og ef of miklu er bætt við getur PCR mögnun verið hindruð.

Ráðlögð PCR skilyrði

Athugið:

a) Hreinsunarhitastig: Með vísan til Tm gildi grunnsins er mælt með því að stilla glæðingarhitastigið á lægra Tm gildi grunnsins +3~5℃.

Algeng vandamál og lausnir

1.Engar markvissar ræmur

1) Of mikil lýsisvara.Veldu viðeigandi magn af sniðmáti, venjulega ekki meira en 1/10 af kerfinu;

2) Of stór úrtaksstærð.Þynntu lýsatið 10 sinnum og magnaðu síðan upp eða minnkaðu sýnisstærðina og endurrýðu;

3) Vefjasýni eru ekki fersk.Mælt er með því að nota fersk vefjasýni;

4) Léleg grunngæði.Notaðu erfðafræðilegt DNA til mögnunar til að sannreyna gæði grunnsins og hámarka hönnun grunnsins.

2.Ósértæk mögnun

1) Hreinsunarhitastigið er of lágt og lotunúmerið er of hátt.Auka glæðingarhitastigið og draga úr fjölda lotum;

2) Sniðmátsstyrkur er of hár.Dragðu úr magni sniðmátsins eða þynntu sniðmátið 10 sinnum eftir mögnun;

3) Lélegt grunnsérhæfni.Fínstilltu grunnhönnunina.

Skýringar

1.Til að forðast krossmengun á milli sýna ætti að útbúa mörg sýnatökutæki og hægt er að þrífa yfirborð verkfæranna með 2% natríumhýpóklórítlausn eða kjarnsýruhreinsiefni eftir hverja sýnatöku ef þörf er á endurtekinni notkun.

2.Mælt er með því að nota ferskan músavef og sýnatökurúmmálið ætti ekki að vera of mikið til að forðast að hafa áhrif á mögnunarniðurstöðurnar.

3.Lysis Buffer ætti að forðast tíða frostþíðingu og má geyma við 2 ~ 8 ℃ til skammtímanotkunar.Ef það er geymt við lágt hitastig getur úrkoma átt sér stað og verður að leysa hana upp að fullu fyrir notkun.

4.PCR Mix ætti að forðast tíða frost-þíðingu og má geyma við 4 ℃ fyrir stutta endurtekna notkun.

5.Þessi vara er aðeins fyrir vísindalegar tilraunarannsóknir og ætti ekki að nota við klíníska greiningu eða meðferð.