BspQI
BspQI er hægt að tjá með raðbrigðum í E. coli sem getur þekkt tiltekna staði og er framleitt undir
BspQI, IIs-takmörkunarendonucleasa-takmörkunarendonuclease, er unnin úr raðbrigða E. coli stofni sem ber klónaða og breytta BspQI genið frá Bacillus sphaericus.Það getur þekkt tiltekna staði og greiningarröð og klofningsstaðir eru sem hér segir:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Eiginleikar Vöru
1. Mikil virkni, hröð melting;
2. Lítil virkni stjarna, sem tryggir nákvæma klippingu eins og „hnífsvörð“;
3. Án BSA og dýraupprunalaust;
Metýlerunarnæmi
Dam metýlering:Ekki viðkvæmt;
Dcm metýlering:Ekki viðkvæmt;
CpG metýlering:Ekki viðkvæmt;
Geymsluskilyrði
Varan ætti að vera send ≤ 0 ℃;Geymið við -25~- 15℃ ástand.
Geymsla biðminni
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM dítíótreítól, 500 µg/ml raðbrigða albúmín, 0, 1% Trition X-100 og 50% glýseról (pH 7,0 @ 25°C).
Eining Skilgreining
Ein eining er skilgreind sem magn ensíms sem þarf til að melta 1 µg af innri stjórn DNA á 1 klukkustund við 50°C í heildarhvarfsrúmmáli 50 µL.
Gæðaeftirlit
Próteinhreinleikagreining (SDS-PAGE):Hreinleiki BspQI var ≥95% ákvarðaður með SDS-PAGE greiningu.
RNase:10U af BspQI með 1,6μg MS2 RNA í 4 klukkustundir við 50 ℃ gefur ekkert niðurbrot eins og ákvarðað er með rafdrætti á agarósageli.
Ósértæk DNase virkni:10U af BspQI með 1μg λ DNA við 50 ℃ í 16 klukkustundir, samanborið við 50 ℃ í 1 klst., gefur ekkert umfram DNA eins og ákvarðað er með rafdrætti á agarósageli.
Ligation og endurskurður:Eftir meltingu á 1 μg λDNA með 10U BspQI er hægt að binda DNA brot með T4 DNA lígasa við 16ºC.Og hægt er að klippa þessa bundnu búta aftur með BspQI.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-sértæk TaqMan qPCR uppgötvun sýndi að E.coli erfðamengisleifar ≤ 0,1pg/ul.
Hýsilpróteinleifar:≤ 50 ppm
Baktería Endotoxín: LAL-próf, samkvæmt kínverskri lyfjaskrá IV 2020 útgáfu, hlaupmörkprófunaraðferð, almenn regla (1143).Innihald endotoxíns úr bakteríum ætti að vera ≤10 ESB/mg.
Viðbragðskerfi og aðstæður
| Hluti | Bindi |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I buffer | 5 μL |
| dd H2O | Allt að 50 μL |
Viðbragðsskilyrði: 50 ℃, 1~16 klst.
Hitaóvirkjun: 80°C í 20 mín.
Ráðlagt hvarfkerfi og aðstæður geta veitt tiltölulega góð ensímmeltingaráhrif, sem er aðeins til viðmiðunar, vinsamlegast skoðaðu tilraunaniðurstöðurnar fyrir nánari upplýsingar.
Vöruumsókn
Takmörkun endonuclease melting, hröð klónun.
Skýringar
1. Rúmmál ensíms ≤ 1/10 af hvarfrúmmáli.
2. Stjörnuvirkni getur átt sér stað þegar styrkur glýseróls er meiri en 5%.
3. Klofningsvirkni getur átt sér stað þegar undirlag er undir ráðlögðu hlutfalli.
