5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
Vörunúmer: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) er mjög stöðug blanda byggð á einni túpu sem hentar fyrir eins skrefs öfuga umritun og magn PCR (qRT-PCR).Það styður forblöndun grunna og prófana og helst stöðugt eftir langa geymslu við lágan hita.Hægt er að bæta við sýninu sem á að prófa beint þegar það er notað, án frekari opnunar/pípettunaraðgerða.Þessi vara veitir íhluti, td heitbyrja DNA pólýmerasa, M-MLV, hitaóhæfan uracil DNA glýkósýlasa (TS-UNG), RNase hemill, MgCl2, dNTP (með dUTP í stað dTTP) og sveiflujöfnun.Með erfðabreyttum hröðum mögnunarbakriti og DNA-pólýmerasa er hægt að ljúka PCR mögnuninni innan 20-40 mínútna.Þetta hvarfefni notar sérstakan jafnalausn fyrir qPCR með blönduðum ensímum af hamlandi mögnunarensími og UNG ensími.Þess vegna getur það fengið góða mögnun á markgenum og komið í veg fyrir falska mögnun af völdum PCR leifar og úðamengunar.Þetta hvarfefni er samhæft við flest flúrljómandi magn PCR tæki frá framleiðendum eins og Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad og Roche.
Hluti
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG blanda
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Geymsluskilyrði
Allir íhlutir ættu að geyma við -20 ℃ fyrir langtíma geymslu og 4 ℃ í allt að 3 mánuði.Vinsamlegast blandið vandlega eftir þíðingu og skilið fyrir notkun.Forðist tíða frost-þíðingu.
Undirbúningur qRT-PCR viðbragðskerfis
| Íhlutir | 25μLKerfi | 50μLKerfi | Lokastyrkur |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG blanda | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Blandaa | 1μL | 2μL | 1× |
| Sniðmát RNAb | – | – | – |
| ddH2O | Allt að 25μL | Allt að 50μL | – |
1) a.Endanlegur styrkur grunns er venjulega 0,2μM.Til að ná betri árangri er hægt að fínstilla grunnstyrkinn á bilinu 0,2-1μM.Almennt er hægt að fínstilla mælikvarðastyrkinn á bilinu 0,1-0,3μM.
2) b.Þegar hröð PCR aðferð er notuð, getur aukning á styrk frumra og rannsaka leitt til betri mögnunarárangurs og hlutfall þeirra ætti að vera fínstillt í samræmi við það.
3) Mismunandi gerðir sýna innihalda mismunandi gerðir og innihald hemils og afritanúmer markgena.Rúmmál sýna ætti að taka tillit til raunverulegs ástands.Þynntu sýnið með nukleasafríu vatni eða TE Buffer, ef þörf krefur.
Viðbrögð Caðstæður
| Venjuleg PCR aðferð | Hratt PCR aðferð | ||||||
| Málsmeðferð | Temp. | Tími | Hringrás | Málsmeðferð | Temp. | Tími | Hringrás |
| Öfug umritun | 50 ℃ | 10-20 mín | 1 | Öfug umritun | 50 ℃ | 5 mín | 1 |
| Pólýmerasi Virkjun | 95 ℃ | 1-5 mín | 1 | Pólýmerasi Virkjun | 95 ℃ | 30s | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 | Denaturation | 95 ℃ | 1-3 sek | 40-50 |
| Hreinsun og Framlenging | 56-64 ℃ | 20-60s | Hreinsun og Framlenging | 56-64 ℃ | 3-20s | ||
Gæðaeftirlit
1.Virknigreining: næmni, sértækni og endurtekningarhæfni qPCR.
2.Engin utanaðkomandi kjarnavirkni: engin utanaðkomandi endonucleasa og exonucleasa mengun.
Skýringar
1.Mögnunarhraði hraðs DNA pólýmerasa er ekki minna en 1kb/10s.Mismunandi PCR tæki hafa mismunandi upphitunar- og kælihraða, hitastýringarham og varmaleiðni, og því er hagræðing á grunni/nemastyrk og keyrsluaðferð ásamt tilteknu hraðvirku PCR tæki nauðsynleg.
2.Þessi vara hefur víðtæka notkun og hún er hentug fyrir hánæma sameindagreiningu.Mælt er með þriggja þrepa PCR aðferð fyrir primera með lágt blöndunarhitastig eða fyrir mögnun á löngum brotum yfir 200 bp.
3.Þar sem mismunandi amplicons hafa mismunandi nýtingarskilvirkni dUTP og mismunandi næmi fyrir UNG, ætti að fínstilla hvarfefnin ef greiningarnæmið minnkar þegar UNG kerfið er notað.Vinsamlegast hafðu samband við okkur til að fá tæknilega aðstoð ef þörf krefur.
4.Til að forðast mögnun á flutningi PCR afurða, þarf sérstakt tilraunasvæði og pípettu til mögnunar.Notaðu með hanska og skiptu oft um og opnaðu ekki PCR slönguna eftir mögnun.
