Ultra Nuclease
UltraNuclease er erfðabreytt endonuclaese unnin úr Serratia marcescens, sem er fær um að brjóta niður DNA eða RNA, annaðhvort tví- eða einstrengja, línulega eða hringlaga við margvíslegar aðstæður, brjóta niður kjarnsýrur að fullu í 5'-einfosfat fákirni með lengd 3-5 basa. .Eftir breytingar á erfðatækni var varan gerjað, tjáð og hreinsuð í Escherichia coli (E. coli), sem dregur úr seigju frumufrumvökvans og frumulýsis í vísindarannsóknum, en bætir einnig hreinsunarskilvirkni og hagnýtar rannsóknir á próteini.Það er einnig hægt að nota í genameðferð, veiruhreinsun, bóluefnisframleiðslu, prótein- og fjölsykru lyfjaiðnaði sem hýsilleifar kjarnsýrueyðingarhvarfsefni.
Eiginleikar Vöru
CAS nr. | 9025-65-4 |
EB nr. | |
Mólþyngd | 30kDa |
Isoelectric Point | 6,85 |
Hreinleiki próteina | ≥99%(SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
Sérstök starfsemi | ≥1.1×106U/mg |
Besta hitastig | 37°C |
Besta pH | 8,0 |
ProteaseActivity | neikvæð |
Lífbyrði | <10CFU/100.000U |
Leifar hýsilfrumu prótein | ≤10ppm |
Þungur málmur | ≤10ppm |
Endotoxín úr bakteríum | <0,25EU/1000U |
Geymslubuff | 20mM Tris-HCl, pH 8,0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl ,50% glýseról |
Geymsluskilyrði
≤0°C flutningur;-25~-15°C Geymsla,2 ára gildistími (forðist frost-þíðingu).
Eining Skilgreining
Magn ensíms sem notað var til að breyta frásogsgildi △A260 um 1,0 innan 30 mín við 37 °C, pH 8,0, sem jafngildir niðurbrotnu 37μg DNA úr laxasæði með því að skera í fákirni, var skilgreint sem virk eining (U).
Gæðaeftirlit
Leifar hýsilfrumu prótein: ELISA sett
•Próteasi Leifar: 250KU/mL UltraNuclease hvarf við hvarfefni í 60 mínútur, engin virkni greindist.
•Endotoxín úr bakteríum: LAL-Próf, Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína bindi 4 (2020 útgáfa) hlaupmörkprófunaraðferð.Almennar reglur (1143).
•Líffræðileg byrði: Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína 4. bindi (2020 útgáfa)— Almennt
Reglur fyrir ófrjósemispróf (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Þungur málmur:ICP-AES, HJ776-2015.
Aðgerð
UltraNuclease virkni var marktækt hindruð þegar SDS styrkur var yfir 0,1% eða EDTA
styrkur var yfir 1mM. Yfirborðsvirkt efni Triton X- 100, Tween 20 og Tween 80 höfðu engin áhrif á núkleasa
eiginleika þegar styrkurinn var undir 1,5%.
Aðgerð | Ákjósanlegur rekstur | Gild aðgerð |
Hitastig | 37℃ | 0-45 ℃ |
pH | 8,0-9,2 | 6.0- 11.0 |
Mg2+ | 1-2mM | 1-15mM |
DTT | 0-100mM | >100mM |
2-merkaptóetanól | 0-100mM | >100mM |
Eingild málmjón (Na+, K+ osfrv.) | 0-20mM | 0-200mM |
PO43- | 0-10mM | 0-100mM |
Notkun og skammtur
• Fjarlægja utanaðkomandi kjarnsýru úr bóluefnisvörum, draga úr hættu á kjarnsýrueitrun leifar og bæta öryggi vöru.
• Draga úr seigju fóðurvökva af völdum kjarnsýra, stytta vinnslutíma og auka próteinuppskeru.
• Fjarlægðu kjarnsýruna sem vafði ögnina (veira, innilokunarhluta osfrv.), sem stuðlar að
til losunar og hreinsunar ögnarinnar.
Tilraunategund | Próteinframleiðsla | Veira, bóluefni | Frumulyf |
Frumnúmer | 1g frumu blautþyngd (endurblandað með 10ml jafnalausn) | 1L gerjun fljótandi flot | 1L ræktun |
Lágmarksskammtur | 250U | 100U | 100U |
Ráðlagður skammtur | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nukleasameðferð getur bætt upplausn og endurheimt sýnisins fyrir súluskiljun, rafdrætti og flekagreiningu.
• Í genameðferð er kjarnsýra fjarlægð til að fá hreinsaðar adeno-tengdar veirur.