CHO HCP ELISA Kit
Eins þrepa ónæmissogandi ELISA aðferð er notuð í þessari greiningu.Sýni sem innihalda CHOK1 HCP hvarfast samtímis við HRP-merkt geita-and-CHOK1 mótefni og and-CHOK1 mótefni sem er húðað á ELISA plötunni og mynda loks samlokusamstæðu úr fastfasa mótefni-HCP-merktu mótefni.Óbundið mótefnavaka-mótefni má fjarlægja með því að þvo ELISA plötuna.TMB hvarfefninu er bætt við brunninn fyrir nægjanlega viðbrögð.Litaþróunin er stöðvuð eftir að stöðvunarlausninni hefur verið bætt við og OD eða gleypnigildi hvarflausnarinnar við 450/650nm er lesið með örplötulesara.OD gildi eða gleypnigildi er í réttu hlutfalli við HCP innihald lausnarinnar.Út frá þessu er hægt að reikna út HCP styrkinn í lausninni í samræmi við staðalferilinn.
Umsókn
Þetta sett er notað til að greina magn af CHOK1 hýsilfrumu próteinleifum í sýnum.
Cstjórnarliðar
| S/N | Hluti | Einbeiting | Geymsluskilyrði |
| 1 | CHOK1 HCP staðall | 0,5mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Andstæðingur-CHO HCP-HRP | 0,5mg/ml | ≤–20 ℃, varið gegn ljósi |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, varið gegn ljósi |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Hættu lausn | NA | RT |
| 6 | Örplötuþéttingar | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Forhúðunarplötur með mikið aðsog | NA | 2-8℃ |
Búnaður þarf
| Rekstrarvörur / Búnaður | Framleiðsla | Vörulisti |
| Örplötulesari | Sameindatæki | Spectra Max M5, M5e eða sambærilegt |
| Hitablöndunartæki | Eppendorf | Eppendorf/5355, eða sambærilegt |
| Vortex hrærivél | IKA | MS3 Digital, eða sambærilegt |
Geymsla og stöðugleiki
1.Flutningur við -25~-15°C.
2.Geymsluskilyrði eru eins og sýnt er í töflu 1;íhlutir 1-2 eru geymdir ≤–20°C, 5-6 eru geymdir RT,3、4、7、8 eru geymdar við 2-8 ℃;gildistími er 12 mánuðir.
Vörubreytur
1.Næmi: 1ng/ml
2.Greiningarsvið: 3-100ng/ml
3.Nákvæmni: CV≤ 10% innan greiningar, CV≤ 15% milli greiningar
4.HCP umfjöllun: >80%
5.Sérhæfni: Þetta sett er alhliða þar sem það hvarfast sérstaklega við CHOK1 HCP óháð hreinsunarferli.
Undirbúningur hvarfefnis
1.PBST 0,05%
Taktu 15 ml af 20×PBST 0,05%, þynnt í ddH2O, og búið til allt að 300 ml.
2.1,0% BSA
Takið 1 g af BSA úr flöskunni og þynnið í 100 ml af PBST 0,05%, blandið vel saman þar til það er alveg uppleyst og geymið við 2-8°C.Tilbúinn þynningarjafnari gildir í 7 daga.Mælt er með því að undirbúa eftir þörfum.
3.Uppgötvunarlausn 2μg/mL
Taktu 48μL af 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP og þynntu í 11.952μL af 1% BSA til að fá endanlegan styrk upp á 2μg/ml greiningarlausn.
4.QC og undirbúningur CHOK1 HCP staðla
| Slöngur Nei. | Upprunalegt | Einbeiting | Bindi | 1% BSA | heildarmagn | Úrslitaleikur |
| A | Standard | 0,5mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tafla: Undirbúningur QC og staðla
Prófunaraðferð
1.Undirbúið hvarfefnin eins og tilgreint er í „Undirbúningur hvarfefna“ hér að ofan.
2.Taktu 50μL af stöðlum, sýnum og QCs (sjá töflu 3) í hvern brunn, bætið síðan við 100μL af uppgötvunarlausn (2μg/mL);Hyljið plötuna með sealer og setjið ELISA plötuna á hitablöndunartækið.Ræktað við 500 snúninga á mínútu, 25±3 ℃ í 2 klukkustundir.
3.Hvolfið örplötunni í vaskinn og fargið húðunarlausninni.Pípettaðu 300μL af PBST 0,05% í hvern brunn til að þvo ELISA plötuna og farga lausninni og endurtaktu þvottinn 3 sinnum.Hvolfið plötunni á hreint pappírshandklæði og þurrkið.
4.Bætið 100μL af TMB hvarfefni (sjá töflu 1) í hvern brunn, innsiglið ELISA plötuna og ræktið í myrkri við 25±3 ℃ í 15 mínútur.
5.Pipettaðu 100μL af stöðvunarlausn í hvern brunn.
6.Mældu gleypni við bylgjulengd 450/650nm með örplötulesara.
7.Greindu gögn með SoftMax eða sambærilegum hugbúnaði.Teiknaðu staðalferil með því að nota fjögurra færibreytur aðhvarfslíkan.
Standard Curve Dæmi
ATHUGIÐ: Ef styrkur HCP í sýninu fer yfir efri mörk staðalferilsins þarf að þynna það rétt með þynningarjafna fyrir prófun.
ATHUGIÐ
Stöðvunarlausnin er 2M brennisteinssýra, vinsamlegast farðu varlega til að forðast að skvetta!
